Проблемы.

К сожалению, искусственное осеменение более дорогой и менее распространенный способ разведения племенных собак, чем ручное спаривание. Для использования этого метода нужны высококвалифицированные специалисты, специальное оборудование, инструменты и материалы.

Мы поставили перед собой задачу осуществить в сравнительном аспекте эксперимента (ручное спаривание) и искусственное (свежеполученной спермой) осеменение собак.

1.1. Факторы, влияющие на эффективное воспроизводство собак.

Сезон осеменения.
По данным некоторых авторов, (С. Гьерра, С. Пети, Р. Бадино) снижение плодовитости возникает, когда вязки или искусственное осеменение проводятся к концу летнего периода, что совпадает соснижением качества спермы у производителей. Но данные исследования не могут нести большую долю вероятности, так как сезонное снижение продуктивности наблюдается не всегда именно в это время года и зависит от множества факторов. Во всяком случае, было бы предпочтительно избегать данного периода и осуществлять репродукцию животных со слабой вероятностью оплодотворения зимой, чтобы увеличить шанс на успех. На рисунке указаны сезонные колебания плодовитости.

Половая и физиологическая зрелость.
Половая зрелость - это возраст, начиная с которого самцы и самки способны участвовать в процессе полового размножения: продуцировать соответствующие клетки (спермии, ооциты) и спариваться. Половая активность у самок носит циклический характер. Готовность к спариванию они демонстрируют только в строго фиксированный период полового цикла - во время половой охоты. Овуляция у собак спонтанная и привязаны к началу половой охоты.

Сроки наступления зрелости у самок определяют по дате проявления первого полового цикла. Обычно первый половой цикл регистрируют в возрасте 6-12 месяцев. У самцов половая зрелость наступает примерно на 1-1,5 месяца позднее, чем у самок. Собаки средних и карликовых пород становятся половозрелыми раньше, чем собаки крупных пород. На сроки наступления половой зрелости существенное влияние оказывают состояние здоровья животного, условия кормления и содержания, общение с противоположным полом.
Половая зрелость обычно наступает раньше, чем заканчивается основной рост, структурное и физиологическое развитие животного, обеспечивающие его высокую плодовитость, нормальное функционирование организма в период беременности, родов и лактации, рождение здорового приплода.

Физиологическая зрелость - возраст, начиная с которого самцов и самок целесообразно использовать для получения приплода. Физиологическая зрелость по времени, как правило, совпадает с достижением размеров тела, характерных для взрослого животного, и проявлением у самок 2-3 половых циклов.

Наступает этот период у крупных и средних пород собак: у сук примерно с 1 года 8 месяцев (3-я течка), у кобелей - примерно с 2-х летнего возраста; у мелких пород собак: у сук - с 1 года 3 месяцев (2-я течка), у кобелей с 1 года 6 месяцев. (Ф.И. Полищук А.Л Трофименко) (..)

Оплодотворяемость.
По данным большинства исследователей оплодотворяемость при естественном осеменении (ручной случки) в среднем составляет 85%, при искусственном осеменении свежеполученной спермой - 70-80%, охлажденной - 60-65%, замороженной - 25-50%.(А.С. Ерохин) (..)

Беременность.
Продолжительность беременности у собак, отсчитываемая со дня первого осеменения, в среднем составляет 63 дня. Длительность плодоношения зависит от породы, числа плодов в матке, возраста самки, условий кормления и содержания, продолжительности периода от осеменения до овуляции, скорости созревания и старения половых клеток и т.д.

Репродуктивные потери в период плодоношения и их причины не изучены.

Послеродовой период.
Это время от изгнания околоплодных оболочек до завершения инволюции (обратное развитие) половых и других органов самки. У собак инволюция - медленный процесс: выделения прекращаются только к 40-45 дню после родов.(18)

Половой цикл.- сложный нейрогуморальный ,цепной ,рефлекторный процесс,сопровождающийся комплексом физиологических и морфологических изменений в половых органах и во всем организме самки от одной стадии до другой.

В кинологической практике время осеменения устанавливают по дню начала течки или половой охоты и по картине влагалищных мазков.
Половой цикл собак уникален, он по многим признакам отличается от цикла сельскохозяйственных и лабораторных животных.

Межэстральный период собак логично делить на следующие четыре стадии: проэструс, эструс, диэструс и анэструс. Стадию метэструса у собак следует рассматривать как постовуляционную фазу эструса. Благодаря делению межэстрального периода на проэструс, эструс, диэструс и анэструс можно избежать путаницы в научной терминологии и обозначить соответствующие стадии полового цикла у животных разных видов одними и теми же терминами.

Проэструс.
Средняя продолжительность проэструса составляет 9 дней. В этот период появляются выделения и самка проявляет интерес к самцу, но не допускает вязки.

Эструс - период половой охоты: положительной сексуальной реакции самки на самца. Половая охота у собак длится в среднем 9 (2-16) дней. Выделения из половой щели, как правило, светлые или со следами крови. Самка проявляет повышенный интерес к самцам, обнюхивает их пловые органы; затем допускает садку и коитус.

Анэструс - период полового покоя. Его продолжительность может сильно варьировать и в среднем составляет 125 дней.

Овуляция у сук происходит через 24-72 часа после предовуляторного пика секреции лютенизирующего гормона. В отличие от других видов животных, у собак овулируют первичные ооциты. Первое мейотическое деление происходит через 24 часа после овуляции, когда ооциты находятся в средней части яйцевода. Завершение созревания ооцитов наступает в среднем через 72 часа после овуляции и они сохраняют способность к оплодотворению в течение 24-96 часов.

У большинства сук предовуляторный пик лютенизирующего гормона в крови наблюдается через 10 дней после начала проэструса.

Свежеполученные сперматозоиды сохраняют биологическую полноценность в половых путях суки в течение 4-6 дней.(34)

Жизнеспособность сперматозоидов, сохраняемых в охлажденном или замороженном состоянии, значительно снижается по сравнению со свежеполученной и поэтому важно проводить искусственное осеменение сук такой спермой в оптимальное время по отношению к овуляции.

Проведены многочисленные исследования по изучению возможности прогнозирования времени овуляции у сук с использованием клинических признаков, ультразвуковой диагностики, вагинальной цитологии и эндоскопии, а также по электросопротивлению слизистой влагалища.

Однако до сих пор отсутствует надежный практический метод прогнозирования сроков овуляции у сук.

По мнению C. Linde-Foresberg (1995) (52) наиболее благоприятным для оплодотворения периодом у сук является время между 2-м и 5-м днем после овуляции. Естественный тип осеменения - маточный.

1.2. Биотехника размножения собак.
Репродуктивная биотехнология - научно изучаемый метод воспроизводства животных и приемы управления половыми процессами.
В настоящее время различают два вида размножения собак. Первый - это естественное осеменение, которое делится на Вольное и Ручное спаривание и Искусственное оплодотворение.

1.2.1 Естественное осеменение.
Вольное спаривание - естественный способ размножения собак. У самок могут быть моно- и полигамные половые акты. При моногамном спаривании собаки совершают по 1-2 коитуса ежедневно с одним самцом на протяжении всей половой охоты. Оплодотворяемость очень высокая. Полигамная вязка часто приводит к рождению потомства от разных самцов. Вольное спаривание способствует бесконтрольному размножению городской и сельской популяции бездомных собак, широкому распространению заболеваний, передающихся половым путем (бруцеллез, трансмиссивная венерическая опухоль и др.), и в целом непригодно для разведения племенных животных.

Ручное спаривание - основной способ разведения собак. Родительские пары подбирают по генеалогическим, экстерьерным и другим признакам.

К спариванию допускают только здоровых животных. Обследованию самок предшествует тщательный сбор сведений об их происхождении, темпераменте, условиях кормления и содержания, о ранее перенесенных заболеваниях, сроках проведения вакцинации и дегельминтизации, особенностях и длительности пустовки (проэструс+эструс), межэстрального периода, наличии и результативности плановых и случайных вязок, продолжительности и особенностях беременности, родов, послеродового периода, лактации, численности и сохранности приплода, причинах его гибели и т.д.

При клиническом осмотре оценивают общее состояние организма самки, его отдельных органов и систем. Тщательно исследуют молочные железы, наружные половые органы, органы брюшной и тазовой полостей для выявления аномалий их развития, новообразований и воспалительных процессов. При наличии показаний используют лабораторные и инструментальные методы исследования.

Собирают также сведения о происхождении, характере, темпераменте и половой активности самца, перенесенных им операциях, травмах и заболеваниях, сроках проведения вакцинации и дегельминтизации, характере кормления, условиях содержания, режиме эксплуатации, числе вязок, их результативности, сохранности приплода и т.д.
При клиническом осмотре самцов особое внимание обращают на мошонку, семенники, их придатки, головку полового члена, предстательную железу; оценивают состояние этих органов, выявляют аномалии развития, новообразования и воспалительные процессы.

Важно тщательно обследовать ротовую полость, поскольку самец при облизывании половых органов самки способен занести в них инфекцию. У самцов-производителей исследуют сперму и при необходимости прибегают к дополнительным лабораторным и инструментальным методам исследования.

Спаривание животных проводят в помещении или на улице в тихой спокойной обстановке под контролем инструктора по вязке и владельца. Сук лучше приводить к кобелям. В привычной обстановке кобели ведут себя более активно в половом отношении. Животных утром не кормят, долго выгуливают на поводках для проявления взаимного полового влечения. Агрессивным животным надевают намордник. Сука в охоте обычно беспрепятственно позволяет кобелю совершать на себя прыжки с допуском коитуса. При необходимости владелец удерживает суку за ошейник и под живот ,а инструктор по вязке помогает кобелю ввести половой член в ее влагалище. После склещивания половых органов кобель спрыгивает с суки и животные принимают удобное для них положение. Собак удерживают за поводки или ошейники до окончания коитуса (полового замка), чтобы они не рвались друг от друга и не травмировали половые органы.

При ручной вязке важно выбрать время и кратность осеменения сук.
Племенных животных обеспечивают полноценным кормлением и активным моционом, приучают к поводку и наморднику. Обязательное условие - ежегодная профилактическая дегельминтизация и вакцинация против чумы плотоядных, аденовирусного гепатита, паровирусного энтерита, лептоспироза и бешенства, а также против микроспории и трихофитии.

Самцов рекомендуют допускать к вязке в возрасте 2-8 лет, самок - 1,5-8 лет. Оптимальный возраст для первой вязки самок не позднее 2,5-3 лет. Режим использования самок - не более одного помета в год.

За молодым физиологически зрелом самцом-производителем закрепляют 3-4 самки (6-8 вязок), а за взрослым в возрасте от 3 до 8 лет целесообразно закреплять 10-15 самок (20-30 вязок), максимально 20 (Карпов В.Я., 1990).

1.2.2. Искусственное осеменение
Искусственное осеменение - это репродуктивная технология , при которой сперму, полученную от самца- производителя при помощи специальных инструментов, вводят в половые пути самки с целью ее оплодотворения.

Различают и осеменяют свежеполученной, охлажденной и криокоесервированной спермой.

В дозе для осеменения должно содержаться 150-200 млн. подвижных сперматозоидов. Осеменение обычно проводят на 11-13-ый день полового цикла с повторением через 48 часов.(27)

Как уже было указано, собак осеменяют свежеполученной, охлажденной (сохраняемой при температуре 2-5 С) и заморожено-оттаянной спермой.

При осеменении свежеполученной спермой получают результаты оплодотворяемости, сравнимые с естественной случкой.(27).

При использовании для осеменения охлажденной спермы, эякулят сразу после получения и оценки разбавляют специальной синтетической средой и сохраняют в охлажденной до +4 состоянии в течение 2-3 суток. В качестве разбавителя используют различные среды, в состав которых входят вещества, оказывающие защитное влияние на половые клетки.

В случае применения высококачественных разбавителей и проведения осеменения в оптимальное по отношению к овуляции время, возможно получать от охлажденного семени высокую оплодотворяемость (75-80%). Но обычно результативность осеменения собак охлажденной спермой на 20% ниже, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.

При использовании для искусственного осеменения замороженной спермы необходимо соблюдать определенные зооветеринарные требования.

На результативность осеменения сук замороженной спермой влияют такие факторы, как состав синтетической среды, качество спермы, температура ее оттаивания, число биологически полноценных сперматозоидов в дозе, время осеменения, техника осеменения и место введения спермы в половые пути самки.

В связи со значительным снижением жизнеспособности оттаянных сперматозоидов в половом тракте суки (менее 24 часов), особое значение имеет правильное время осеменения.
При использовании замороженной спермы принимают влагалищное или внутриматочное ее введение.

Результаты использования замороженной спермы в различных странах показали, что средняя оплодотворяемость сук при влагалищном введении семени ниже на 30%, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.

Для повышения эффективности осеменения сук замороженной спермой, предлагается лапароскопическое или трансцервикальное внутриматочное введение спермы с помощью специальных методик. При этом результативность осеменения значительно возрастает.

Разработано два способа искусственного осеменения собак - влагалищный и маточный.

Влагалищный способ на сегодняшний день остается основным. Самку удерживают в стоячем положении. Половые органы ее обмывают теплой водой и орошают 1%-м раствором бикарбоната натрия. По верхнему своду преддверия влагалища и влагалища вводят укороченный стерильный полистироловый катетер для осеменения коров цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки. Продвижение катетера к цервикальному каналу контролируют рукой через брюшную стенку. С помощью резиновой трубочки к катетеру присоединяют стерильный одноразовый шприц со спермой. Заднюю часть тела собаки принимают на левое бедро осеменатора, сидящего на стуле. Собаку удерживают в наклонном положении: спереди за ошейник - владелец, сзади - осеменатор. Левой рукой осеменатор удерживает самку за левое бедро, правой медленно вводит сперму из шприца во влагалище. Катетер извлекают, в преддверие и каудальную часть влагалища вводят на 10 минут большой палец для имитации "полового замка" и стимуляции антиперистальтических сокращений в матке. По материалам японских исследователей (Tsuitsu T. Et al., 1989) (74), уже через 2,5 мин. После введения спермы в краниальную часть влагалища спермии оказываются в полости верхушки рогов матки. После осеменения собаку выгуливают 30 мин., не позволяя ей бегать, прыгать и садиться. Хорошие результаты получают при осеменении собак свежеполученной спермой. Эффективность осеменения заморожено-оттаянной спермой остается очень низкой, охлажденной - зависит от срока ее хранения.

Внутриматочный способ практикуют редко. Этот метод разработан, чтобы повысить эффективность осеменения заморожено-оттаянной спермой. В литературе описаны два нехирургических и два хирургических способа внутриматочного осеменения собак.

Нехирургический внутриматочный способ осеменения собак с помощью норвежского катетера, применяемого для осеменения лисиц, разработан в Швеции. Используют: металлический катетер длиной 20-50 см, диаметром 0,5-1 мм, нейлоновую протекторную оболочку, одноразовый шприц на 2 мл.

Металлический катетер в нейлоновой протекторной оболочке вводят по верхнему своду влагалища в его краниальную часть. С помощью большого и указательного пальцев захватывают шейку матки и контролируют продвижение катетера до входа в цервикальный канал. Металлический катетер выдвигают из защитной оболочки. Осторожно манипулируя катетером и шейкой матки, отыскивают вход в канал шейки матки. Цервикальный канал проходят, вращая катетер и оттягивая шейку матки назад. Длина канала шейки матки составляет всего 0,5-1 см. Сперму вводят, удостоверившись, что кончик катетера находится в теле матки. Катетер извлекают. Самке придают наклонное положение и удерживают в нем в течение 10 минут, введя во влагалище большой палец.

Недостаток способа: неприятен для нервных и тучных собак; связан с риском травмирования и инфицирования половых органов самки; технически трудновыполним - необходимы специальная подготовка и постоянная практика. Опытный ветеринарный врач на отыскание шейки матки и введение катетера в полость тела матки затрачивает около минуты.

Нехирургический внутриматочный способ осеменения при помощи эндоскопа разработан в США. Используют: цистоэндоскоп диаметром 3 мм, длиной 30 см для визуализации шейки матки, пластиковый катетер для катетеризации мочевого пузыря у самцов или ангиографический катетер диаметром 3 мм.

Преимущества использования эндоскопа: инструмент для осеменения вводят в цервикальный канал под визуальным контролем, заметно снижен риск травмирования и инфицирования половых органов. Недостатки способа: не приемлем для нервных самок и самок с длинным влагалищем; процедура внутриматочного осеменения очень сложна и трудоемка, связана с применением дорогих инструментов и необходимостью специальной предварительной подготовки.
Хирургический внутриматочный способ осеменения через разрез брюшной стенки заключается в следующем. Самок выдерживают на голодной диете 18-24 часа. Под общим наркозом фиксируют на столе в спинном положении. Крышку операционного стола переводят в наклонное положение, чтобы вызвать смещение внутренних органов вперед и облегчить процедуру обнаружения рогов матки в брюшной полости. С соблюдением правил асептики и антисептики подготавливают операционное поле и делают разрез по белой линии живота. Извлекают рога матки. При помощи шприца с иголкой в их полость вводят сперму. Брюшную стенку зашивают обычным способом.

Процедура осеменения этим способом очень проста, но трудоемка, связана с использованием общего наркоза и возможна только в условиях клиники.

Хирургический внутриматочный способ осеменения с помощью лапароскопа и специальной пипетки с игольчатым наконечником разработан в Японии (Tsuitsu T. Et al., 1989) (74)и подробно описан (Silva L.D.M. et al., 1994) (70). Самку выдерживают на голодной диете. Под общим наркозом фиксируют на операционном столе в спинном положении. Вентральную поверхность живота выбривают, обрабатывают антисептиками. При помощи иглы в брюшную полость накачивают диоксид углерода. Отступив от пупка 1 см назад по белой линии, при помощи троакара сначала в брюшную полость вводят световод диаметром 8 мм, соединенный с камерой лапароскопа, и отыскивают рога матки, затем на правой стороне живота, отступив 2 см в сторону заднебрюшной молочной железы, вводят второй троакар диаметром 5 мм. Эндоскопическими щипцами, введенными в брюшную полость через канюлю троакара, захватывают тело матки и подтягивают к вентральной поверхности брюшной стенки. Брюшную стенку и рог матки прокалывают иглой, через которую вводят внутриматочный катетер. Иглу извлекают и через катетер осеменяют самку.

Недостатки способа: очень сложен, трудоемок, связан с использованием дорогостоящей аппаратуры, малопригоден для производственного .

При проколе брюшной стенки существует риск повреждения крупных сосудов и внутренних органов.

Технология искусственного осеменения.
Технология искусственного осеменения собак состоит из следующих этапов:
1. Получение спермы.
2. Оценка качества эякулята.
3. Разбавление и хранение спермы вне организма.
4. Определение времени осеменения самки.
5. Введение спермы в половые органы самки.

Способы получения спермы.
Сперму от самцов-производителей получают, используя мануальный массаж (мастурбацию) или искусственную вагину.
Мануальный массаж (мастурбация) - основной способ получения от самцов спермы хорошего качества. Технически данный способ несложен. У самцов быстро вырабатывается рефлекс на мастурбацию. Первые несколько раз сперму лучше брать в присутствии самки в охоте. Самцу позволяют ее обнюхать, совершить несколько сидок, не допуская коитуса. Затем через препуциальный мешок рукой массируют половой член. При появлении признаков эрекции препуциальный мешок отводят назад и выводят наружу краниальную часть полового члена. Половой член сверху и позади его луковицы обхватывают большим и указательным пальцами правой руки и ритмично сживают. Этот прием приводит к полной эрекции пениса и эякуляции. Сперма (эякулят) выделяется и состоит из трех четко разделенных фракций.

Первая фракция эякулята, как правило, не содержит спермиев и представляет собой прозрачный бесцветный жидкий секрет, в ее состав входят секреты уретральных желез. Эта фракция выделяется в течение 0,5-1 минуты и выполняет роль смазки.

Вторая фракция эякулята мутно-белого цвета как правило состоит из спермиев и незначительного количества жидкого секрета. При ее выделении самцы обычно совершают ритмичные толкательные движения тазом. Выделяется в течение 1-2 минут.

Третья фракция эякулята бесцветная и прозрачная, представляющая собой секрет предстательной железы и, как правило, не содержит спермиев. При выделении этой фракции спермы половой член поворачивают на 180º и отводят назад для имитации "полового замка". Продолжительность ее выделения составляет 5-30 минут.

Сперму получают в широкогорлый спермоприемник или стаканчик, подставленный к головке пениса.

Необходимо соблюдать осторожность при получении второй фракции спермы, поскольку при ее выделении самцы обычно совершают резкие совокупительные движения тазом. Для искусственного осеменения используют вторую и часть третьей фракции эякулята. Некоторые исследователи рекомендуют получать отдельно третью фракцию эякулята и используют ее в качестве разбавителя при осеменении заморожено-оттаянной спермой.

Искусственная вагина - специальный прибор, имитирующий влагалище самки. Разработано несколько конструкций искусственных вагин для получения спермы от собак.

Наиболее распространенная из них модель, предложенная А.Е. Наrrор (1954) (41), состоит из наружного упругого резинового цилиндра размером 5х15 см и внутренней эластичной резиновой трубки, закрепленной на обоих концах цилиндра. Между цилиндром и резиновой трубкой образуется замкнутая резиновая камера, соединенная через

Более простую и эффективную модель искусственной вагины для получения спермы от собак предложил S.W. Saeger (1977) (68): она состоит из односторонней конусовидной резиновой трубки и пластмассовой градуированной центрифужной пробирки объемом 15 мл. После выведения пениса из препуция на него надевают искусственную вагину и приступают к мастурбации. Дигитальный массаж основания полового члена приводит к полной эрекции пениса и выделению спермы.
Указанными способами можно получать эякуляты, как разделенные, так и не разделенные на фракции.

Основные показатели спермы собак.
Объем целого эякулята и отдельных его фракций может сильно варьироваться и зависит от многих факторов: размера, возраста, состояния здоровья и индивидуальной потенции самца-производителя, а также режима его полового использования, способа получения спермы.
Разные исследователи по-разному оценивают объем целого эякулята и отдельных его фракций. Например, Г.П. Дюльгер(..) считает, что при получении спермы посредством мастурбации объем неразделенного на фракции эякулята у самцов массой менее 20 кг составляет в среднем 5,4 мл, у самцов массой более 20 кг - 12,5 мл.

По другим данным Amman (+) средний объем эякулята у собак массой 10-34 кг составляет 2,4 0,3 мл; 35-39 кг - 3,9 0,5 мл и массой 60-84 кг - 5,4 1,3 мл. При этом средняя концентрация сперматозоидов в эякуляте была 209,359 и 228 млн/мл соответственно.
По данным Cristiansen Ib.J. (1984) продолжительность эякуляции и объем отдельных фракций спермы в зависимости от способа получения эякулята сведены в таблицу.

Фракция
эякулята Искусственная вагина Мастурбация
Продолжительность эякуляции, с Объем мл Продолжительность эякуляции Объем мл
Первая 2,7 0,9 13,5 0,1 – 0,3
Вторая 52 2,6 54,4 0,5 – 4,0
Третья 480 9,2 415 1 – 30

Препараты, используемые при искусственном осеменении.
По безвредности препараты подразделяют на абсолютно безвредные (глюкоза, цитрат натрия и др.), безвредные (лактоза и др.), относительно безвредные (хлорид натрия, бикарбонат натрия и др.), условно безвредные (трис буфер, глицерин, антибиотики и др.), и вредные (спирт, перекись водорода и др.). В практике искусственного осеменения используют вещества, относящиеся к первым четырем группам. Абсолютно безвредные, безвредные и относительно безвредные препараты можно использовать в изотонических концентрациях, условно безвредные вводят в состав сложных искусственных сред в небольших количествах, чтобы повысить устойчивость спермиев к действию различных внешних факторов - замораживанию, контаминации микроорганизмами и др.

Оценка эякулята.
Сперму получают только от здоровых, физиологически зрелых самцов в манеже с соблюдением ветеринарно-санитарных правил и не более 2-3 раз в неделю. При этом в дозе криоконсервированной спермы должно содержаться не менее 150-200 млн. подвижных сперматозоидов. В процессе замораживания погибают 40-50% сперматозоидов. Поэтому, в среднем за неделю, от одного производителя можно заготовить замороженной спермы, достаточной для плодотворного осеменения только 1-2 сук.

Более интенсивное использование самцов-производителей приводит к половому истощению и ухудшает качество спермы. Для хранения спермы в замороженном состоянии от собак получают 2 эякулята с перерывом 1-2 ч (в неделю).

Качество спермы оценивают сразу же после ее получения.

Сперму исследуют макро- и микроскопически. При макроскопическом исследовании определяют ее объем, цвет, запах и консистенцию; при микроскопическом - активность спермиев, их концентрацию, процентное соотношение нормальных и патологических форм.
В норме сперма собак консистенции и цвета обезжиренного молока, без запаха. Сперму с неприятным запахом, загрязненную кровью (гемоспермия), мочой (уреспермия), гноем (пиоспермия) выбрасывают. При выделении такой спермы самца-производителя тщательно обследуют, назначают соответствующее лечение и не допускают к использованию до полного выздоровления.

Активность спермиев определяют под микроскопом при температуре 38-39ºС , используя специальный обогревательный столик. На чистое предметное стекло наносят каплю спермы и накрывают покровным стеклом. Раздавленную каплю исследуют под микроскопом в неярком свете при увеличении в 200-300 раз. Сперму оценивают визуально по десятибалльной шкале, определяя количество спермиев с прямолинейно-поступательным движением. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой практически все спермии двигаются прямолинейно-поступательно. При оценке в 9 баллов примерно 90% спермиев двигаются прямолинейно-поступательно. При оценке 8 баллов примерно 80% спермиев двигаются прямолинейно-поступательно, при оценке 5 баллов - 50% и т.д. Сперму, не содержащую спермиев, обозначают буквой А (аспермия), с мертвыми спермиями - буквой Н (некроспермия). Нормальная активность спермиев собаки составляет 7-10 баллов.

Концентрация спермы - показатель, который определяют при помощи счетной камеры Горяева, используемой для подсчета эритроцитов и лейкоцитов (наиболее простой и достаточно надежный способ), а также при помощи фотоэлектрического колориметра или автоматического счетчика клеток. Камера Горяева состоит из толстого предметного стекла, разделенного поперечными прорезями на три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 1/10 мм и разделена продольной прорезью на две части, на каждой из которых выгравирована сетка. Каждая сетка состоит из 225 больших квадратов, из них 25 разделено на 16 маленьких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм².

Для подсчета спермиев пробу спермы предварительно разбавляют 3%-м раствором хлорида натрия. В гипертоническом растворе хлорида натрия спермии становятся неподвижными (погибают), это облегчает подсчет. Сперму разбавляют в 100 раз при помощи эритроцитарного меланжера. Для этого в меланжер вначале набирают сперму до отметки

Концентрация спермы собак может сильно варьировать от 25 млн до 400 млн клеток в 1 мл. По этой причине качество спермы оценивают не по ее концентрации, а по числу активных спермиев в эякуляте.

Ценным показателем служит процентное соотношение нормальных и патологических форм спермиев. Чтобы определить их соотношение, наносят на край обезжиренного, сухого, чистого и теплого предметного стекла 1 каплю спермы и 2-3 капли 0,9%-го раствора хлорида натрия. Капли быстро перемешивают стеклянной палочкой и делают при помощи шлифованного стекла тонкий мазок. Мазок высушивают, фиксируют несколько минут 96%-м спиртом и окрашивают не менее 5 минут 1-2%-м раствором эозина. Раствор краски готовят на 2,9%-м растворе цитрата натрия. Краску на стекле смывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Просохший мазок просматривают под микроскопом при увеличении в 400-600 раз и подсчитывают в нескольких полях зрения не менее 200 спермиев. Число нормальных и патологических форм спермиев по каждому полю зрения суммируют и определяют их процентное соотношение.

К патологическим формам спермиев относят: гигантские, карликовые, с деформацией головки, с двумя головками, с надломом шейки и ее эксцентричным креплением к головке, изолированные головки, с искривленным и закрученным хвостом, с двумя хвостами, с цитоплазматической каплей и т.д.

В нормальной сперме собак удельный вес патологических форм спермиев не должен превышать 30 %.

Хранение спермы.
Собак осеменяют свежеполученной, охлажденной (сохраняют при температуре 2-5º С) и замороженно - оттаянной спермой.

Свежеполученную сперму используют сразу же после оценки ее качества. К использованию допускают эякуляты, содержащие не менее 60 млн активных спермиев. Наилучшие результаты получают при содержании в спермодозе не менее 200 млн активных спермиев.

Охлаждение - наиболее отработанный способ хранения спермы вне организма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы собак используют молочную и цитратно-желточную среду.
Молочная среда. Свежее цельное или лучше обезжиренное коровье молоко - 200 мл, пенициллин и (или) стрептомицин - 0,05-0,1 г.

Молоко берут от клинически здоровых коров с отрицательными результатами исследований на туберкулез, лептоспироз, бруцеллез, а также мастит. Желательно подобрать коров, продуцирующих молоко низкой жирности, поскольку молочные жировые икринки значительно затрудняют оценку качества разбавленной спермы. Молоко обязательно подогревают на водяной бане в течение 10 минут при температуре 92-96 градусов для разрушения некоторых его белков, оказывающих на спермии токсическое действие. Затем молоко процеживают через 3-4 слоя стерилизованной марли, охлаждают до 35-39 С и добавляют антибактериальный препарат.

Цитратно-желточная среда. Цитрат натрия трехзамещенный пятиводный - 2,32 г, свежий желток куриного яйца - 20 мг, пенициллин и (или) стрептомицин - 0,05- 0,1 г, вода дистиллированная (бидистиллированная) - 80 мг.

Навески цитрата натрия вносят в чистую стерильную колбу. Вливают в колбу прокипяченную и остуженную дистиллированную воду; фильтруют, добавляют антисептик и желток куриного яйца. Перед извлечением желтка скорлупу яйца обеззараживают при помощи бактерицидной лампы или спиртового ватного тампона.

Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Последнюю разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температура спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев.

Разбавляют сперму в градуированном смесителе, при этом среду добавляют небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму. Разбавленную сперму медленно охлаждают и хранят при температуре 2-5 С до 4-5 суток. В первые сутки хранения оплодотворяющая способность охлажденной спермы соответствует свежеполученной, на 4-е сутки она лучше, чем замороженно-оттаянная.

Криоконсервация, или замораживание - самый перспективный способ хранения спермы вне организма. Впервые собаку успешно осеменили замороженно-оттаянной спермой в 1969 году в США.

Методические основы замораживания и хранения спермы собаки и быка одинаковы. Сперму разбавляют в 4-9 раз приопротектной средой (до концентрации не менее 40-80 млн активных спермиев в 1 мл). В качестве приопротектной среды обычно используют трис-буферный разбавитель, содержащий 20% желтка куриного яйца, 4-10% глицерина, или же лактозо (11%)-желточно (20%)-глицериновую (4-16%) среду. Сперму кобелей обычно замораживают в виде гранул объемом 0,2 мл, полипропиленовых соломинках (пайетах) объемом 0,5 - 1 мл или ампулах объемом 1 мл, в парах жидкого азота или на блоках твердого диоксида углерода (-79 С) и хранят в жидком азоте (-196 С).

Сперму в соломинках размораживают на водяной бане (при температуре 38-40 С) в течение 30 с, а сперму, замороженную в гранулах, при 37 С в изотонических растворах. Активность размороженной спермы собак обычно составляет 6-7 баллов. Сперму активностью ниже 4 баллов не используют.

Результативность осеменения собак замороженно-оттаянной спермой оставляет желать лучшего, и поэтому криоконсервирование спермы собак практикуют редко, хотя в настоящее время центры по криоконсервации спермы собак работают во многих странах мира и используют практически одинаковые методы ее глубокого замораживания, но при этом применяют различные синтетические разбавители, в том числе и патентованные.

На сегодняшний день замороженная сперма собак экспортируется в страны Европы, Скандинавии, Северной Америки и Австралии.
По данным Американского клуба собаководов, в период с 1981 по 1991 г. От самок, осемененных замороженно-оттаянной спермой, получили всего 240 пометов.

2. Собственные исследования.

2.1. Цель и задача исследования
Цель исследования: оценить эффективность искусственного и естественного (ручная вязка) осеменения собак.

2.2. Методика и материалы исследования
Работа выполнена на базе ветеринарной клиники при Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева на протяжении 12 месяцев с февраля 2003 по март 2004 г.

Объектом исследования служили 10 клинически здоровых и физически развитых сук различного возраста породы Среднеазиатская овчарка.

До момента включения собак в настоящий эксперимент от каждой из них было получено от 1 до 2х пометов.

Условия кормления и содержания собак были примерно одинаковые (кормами натурального происхождения). Примерный состав рациона описан в приложении 1.
В соответствии с целью исследования собак разделили на две группы - опытную (n=5) и контрольную (n=5) . животных опытной группы осеменяли искусственно. Контрольную группу - естественным образом (ручная случка). Сук осеменяли спермой одного и того же кобеля-производителя. Методика выбора времени осеменения животных опытной и контрольной групп была одинаковая: время осеменения планировали по дате начала течки. Время проведения осеменения у сук опытной и контрольной группы определяли по дате начала течки.

В зависимости от степени выраженности признаков течки и половой охоты первое осеменение сук опытной и контрольной групп производили на 11-13 день от начала течки. Второе - соответственно через 48 часов.
До включения в опыт от кобеля было получено 2 эякулята с перерывом 7 дней для оценки его качества. Сперму получали методом мастурбации по методике, описанной в разделе "Обзор литературы". Объем неразделенного на фракции эякулята колебался от 12 до 20 мл., активность спермы была не ниже 6 баллов, процент патологических форм спермиев не превышал 30%, суммарное число активных спермиев в эякуляте достигало 150 - 200 млн.

Естественное осеменение (ручную случку) собак контрольной группы проводили по общепринятой методике.

Для искусственного осеменения сук сперму от кобеля-производителя получали непосредственно перед проведением искусственного осеменения. Для их осеменения использовали вторую и частично третью фракции спермы. Набор для осеменения состоял из одноразовых инструментов: шприца на 20 мл. и полистеролового катетера, применяемого для катетеризации мочевого пузыря собак.

Суку фиксировали в наклонном положении. Половую петлю обрабатывали антисептическим раствором (лизонин), обильно орошали однопроцентным стерильным раствором бикарбоната натрия и высушивали стерильной салфеткой. Под контролем пальцев катетер вводили по верхней стенке влагалища на максимально возможную глубину. К катетеру присоединяли шприц со спермой и нажатием на поршень ее медленно вводили в краниальную часть влагалища. После

Результативность осеменения сук опытной и контрольной групп определяли по частоте наступления беременности (в процентах) и размеру полученного от них помета.

Диагностику беременности проводили трансабдоминальной пальпации на 45-50 день после осеменения.
Полученный цифровой материал подвергли статистической обработке. Результаты исследования представлены в процентах и средними величинами и их стандартными ошибками М +m.

Схема опыта приведена ниже.

Табл.2
Схема опыта.

Схема опыта.
Эффективность естественного (ручная вязка) и искусственного осеменения собак породы СРЕДНЕАЗИАТСКАЯ ОВЧАРКА.
Контрольная группа (n=5) Опытная группа (n=5)
Способ осеменения
Естественное (ручная вязка) осеменение Искусственное осеменение
Кратность осеменения
Двукратно с интервалом в 48 часов Двукратно с интервалом в 48 часов
Диагностика беременности
Результаты щенения

2.3. Результаты исследований и их обсуждение.

Характеристика сук контрольной группы.
показатели Сука №1 Сука№2 Сука№3 Сука№4 Сука№5
Дни вязки от начала течки (дней) 11/13 12/14 11/13 11/13 12/14
Степень выраженности положительной реакции самки на самца +/+ +/+ +/+ +/+ +/_+
Степень
выраженности течки / / / / /
Продолжительность полового акта (мин.) 30/40 30/45 25/30 35/30 25/20
Продолжительность беременности (дней) 63 59 63 62 пустовала
Размер помета (голов) 7 8 7 10 -

У суки 1 на 11 день течки половая петля отечная, мягкая; выделения соломенного цвета. По отношению к кобелю самка вела себя активно - замирала и принимала характерную позу, отводя хвост в сторону. В результате вязка произошла без осложнений. Длительность полового замка составила 30 минут. На 13-й день сука 1 была повязана повторно. Половая охота усилилась. Половые губы стали мягче, выделения светлые без примеси крови, при прикосновении к петле - подергивала ею. Садку позволила сразу, половой замок длился 40 минут. В результате продолжительность щенности составила 63 дня. Выход щенков в помете составил 7 голов.

Сука 2 на 12-й день проявляла неуверенное поведение, хотя все признаки половой охоты присутствуют. Сука была повязана только после того, как ее зафиксировали и надели намордник. Длительность замка 30 минут. На 14-й день поведение самки изменилось, она стала больше интересоваться кобелем. Половые губы мягкие, увеличенные в размере, выделения из половой щели стали светлее, без примеси крови. При поглаживании по крупу отводила хвост в сторону, и самостоятельно фиксировала петлю. Во время садки она отнеслась к кобелю более благосклонно, и процесс вязки происходил уже без насильной фиксации суки. Продолжительность полового замка составила 45 минут. Беременность продолжалась 59 дней, количество щенков в помете - 8 голов.

Сука 3 на 11-й день демонстрировала полную готовность к спариванию, обнюхивала половые органы самца, заигрывала с ним, во время садки стояла неподвижно и отводила хвост в сторону. Вязка не потребовала ее фиксации. Во время первой вязки длительность полового замка составила 25 минут. Во время контрольной вязки - 30 минут. Половое поведение во время второй вязки такое же, как и в первый раз. Беременность продолжалась 63 дня. Родилось 7 щенков.

Сука 4 на 11-й день от начала течки сука проявляла интерес к кобелю, позволяла ему обнюхивать и облизывать свои половые органы. Половые губы темные, увеличенные в размере, выделения из половой щели светлые без примеси крови. Вязалась охотно. Замок продолжался 35 минут. На 13-й день поведение не изменилось, она также охотно принимала ухаживания кобеля, заигрывала, принимала соответствующую для вязки стойку. Длительность замка составила 30 минут. Продолжительность беременности 62 дня. Количество рожденных щенков - 10 голов.

Сука 5 на 12-й день течки поведение пассивное, сука демонстрировала агрессию по отношению к кобелю. Выделения с примесью крови. Слизистая оболочка наружных половых органов покрасневшая, вульва увеличена. При вязке суку пришлось жестко фиксировать, во время замка, который длился 25 минут сука постоянно вырывалась, старалась уйти или лечь. На 14-й день течки поведение суки изменилось не сильно, она также продолжала проявлять агрессию к кобелю, половые губы стали менее отечными, выделения стали более светлыми. Во время вязки ее опять пришлось фиксировать, продолжительность замка составила 20 минут. Несмотря на это сука пропустовала. Соответственно, приплода от нее получено не было.

Таким образом, из 5 сук, находящихся в контрольной группе, вязка оказалась результативной у 4 -х, или у 80 %.
Признаки половой охоты и течки у всех сук опытной группы были хорошо выражены как при первой вязке, так и при повторном осеменении.

Несмотря на все признаки половой охоты многие из них проявляли излишне агрессивное поведение по отношению к кобелю, поэтому во избежание травм во время склещивания, был принято решение осеменить их искусственно. Также, как и в контрольной группе, беременность развилась у 4 -х из 5 оплодотвореных сук. Сведения о беременности и размере помета приведены в таблице 3.

Характеристика сук опытной группы

показатели 1 сука 2 сука 3 сука 4 сука 5 сука
Дни осеменения от начала течки 12-14 11-13 12-14 11-13 11-13
Степень выраженности + _ + + +
Положительная реакция на самца +/+ +/+ +/+ +/+ +/+
Продолжительность полового акта (мин.) - - - - -
Продолжительность беременности (дней) 67 63 65 - 63
Размер помета (голов) 8 6 7 - 10

.

Продолжительность полового акта, беременности и размер помета у сук опытной и контрольной группы.

Таблица 4
показатели Группа
контрольная опытная
М + m М + m
Продолжительность полового акта ( мин.)
При первой вязке
При второй вязке

29 + 0,9
33 + 4,9

-
-
Продолжительность беременности (дней)
61,75 + 1,09
64,5 + 1,1
Число щенков в помете (голов)
8 + 0,8
7,75 + 0,9

Продолжительность полового акта, беременности и размер помета у сук опытной и контрольной группы.

Данные о средней продолжительности полового акта, средней продолжительности беременности и размерах помета у сук опытной и контрольной группы приведены в таблице 4.

Продолжительность полового акта, беременности и размер помета у сук опытной и контрольной группы.

Таблица 4
показатели Группа
контрольная опытная
М + m М + m
Продолжительность полового акта ( мин.)
При первой вязке
При второй вязке

29 + 0,9
33 + 4,9

-
-
Продолжительность беременности (дней)
61,75 + 1,09
64,5 + 1,1
Число щенков в помете (голов)
8 + 0,8
7,75 + 0,9

3. Выводы.
По результатам данного исследования можно сделать следующие выводы:
1. По своей эффективности искусственное осеменение соответствует возможности ручной вязки.
2. Частота наступления беременности при осеменении сук свежеполученной спермой составляет 80 %. Размер помета 7,75 щенков.
3. Ручное спаривание обеспечивает наступление беременности в 80% случаев при размере помета 8 щенков.

4. Практическое предложение.
Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать нам метод искусственного осеменения для более широкого применения в кинологической практике.

ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИМЕРНЫ РАЦИОН КОРМЛЕНИЯ БЕРЕМЕННЫХ СУК (при кормлении натуральными продуктами).
Основные продукты рациона:
МЯСО: баранина, говядина, конина, козлятина.
Субпродукты сырые: рубец, сетка, книжка крупного рогатого скота
Субпродукты вареные: сердце, печень
Крупы: гречневый продел, рис, геркулес
Овощи: морковь, тыква, кабачки, яблоки, топинамбур
Кисломолочные продукты: творог, кефир, простокваша, йогурт
Кормовые и минеральные добавки: минеральные специализированные добавки ( «Косточка») и пшеничные отруби.

отсюда